بررسی شاخص های پیری و ردیابی ژن آلفامانوزیداز مرتبط با پیری در چند رقم گیلاس
دسته: مهندسی کشاورزی بازدید: 5 بار فرمت فایل: docx حجم فایل: 3121 کیلوبایت تعداد صفحات فایل: 84
این کار تحقیقی در دو بخش بیوشیمیایی و بیوتکنولوژی در محل آزمایشگاه علوم باغبانی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان انجام شد
قیمت فایل فقط 16,900 تومان
بررسی شاخص های پیری و ردیابی ژن آلفامانوزیداز مرتبط با پیری در چند رقم گیلاس
این کار تحقیقی در دو بخش بیوشیمیایی و بیوتکنولوژی در محل آزمایشگاه علوم باغبانی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان انجام شد. در بخش بیوشیمیایی، جهت بررسی تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر شاخصهای کیفی و روند پیری دو رقم زودرس و دیررس گیلاس، آزمایشی فاکتوریل در قالب طرح بلوکهای کامل تصادفی و در چهار تکرار صورت گرفت. تیمار اول، رقم (کرج و تکدانه) و تیمار دوم، اسید آبسیزیک (در دو غلظت صفر و ppm200) مورد بررسی قرار گرفتند. میوهها در فواصل زمانی پنج روز و طی مدت 20 روز از زمان برداشت، از لحاظ تغییرات صفات کیفی ارزیابی شدند. طبق نتایج بدست آمده، با گذشت زمان، سفتی در هر دو رقم کاهش یافته، و در نمونههای تیمار شده با اسید آبسیزیک کاهش بیشتری نشان داد. میزان آنتوسیانین روند افزایشی داشت. میزان کلروفیل کل و کاروتنوئید دم میوهها با گذشت زمان به طور معنیداری کاهش یافت. مواد جامد محلول میوهها تا روز دهم کاهش و در روز پانزدهم افزایش پیدا کرد. اسیدیته میوهها روند نزولی داشت و در روز بیستم اختلاف معنیداری بین نمونههای تیمار شده و تیمار نشده مشاهده شد. با گذشت زمان در میزان قند کل میوهها تغییر معنیداری مشاهده نشد اما به طور کلی تغییرات قند کل دارای روند افزایشی بود. روند تغییرات فروکتوز برای نمونههای تیمار شده و تیمار نشده با اسید آبسیزیک، در رقم کرج معنیدار نبود اما بین رقم تکدانه تیمار شده و تیمار نشده با اسید آبسیزیک اختلاف معنیداری در روز 15 و 20 مشاهده گردید. با توجه به این نتایج، میتوان نقش اسید آبسیزیک را در ایجاد تغییرات کیفی و همچنین تاثیر بر روند پیری میوهها، مورد توجه قرار داد. در بخش بیوتکنولوژی، ژن آلفامانوزیداز (یک ژن مرتبط با پیری) برای اولین بار، در پنج رقم مختلف گیلاس شناسایی و تعیین توالی شد. به این منظور، آغازگرهای رفت و برگشت ژن مورد نظر از طریق مراجعه به پایگاه داده NCBI و استفاده از توالیهای مربوط به ژن آلفامانوزیداز برای هلو و فلفل، با استفاده از کپی کامل cDNA هلو و فلفل طراحی شد. به علت زیاد بودن طول ژن سه جفت آغازگر طراحی شد گه این آغازگرها قادرند طول 3100 جفتباز را پوشش دهند. همچنین دمای اتصال آغازگرها با استفاده از برنامه گرادیانت PCR بدست آمد. بعد از استخراج DNA ارقام گیلاس، یک قسمت از ژن مذکور تکثیر، توالییابی (با استفاده از نرمافزار سنگر) و همردیفسازی توالیها انجام شد و نمودار دندروگرام مربوط به آن با استفاده از نرمافزار 3 View رسم گردید. بررسی و مقایسه توالیهای معکوس، شباهت و تفاوتهایی را در ارقام مختلف نشان داد که بر طبق آن ارقام پیشرس (ER)، پیشرس خارجی (FE) و دیررس (LR) دارای شباهت بیشتر بوده و در یک گروه قرار گرفتند. ارقام پیشرس قزوین (GH) و دومرس (MR) دارای تفاوت بیشتری نسبت به سه رقم اول بوده و با یکدیگر نیز تفاوت نشان داده و هرکدام به طور جداگانه یک گروه مجزا را تشکیل دادند.این تفاوتها میتوانند در عملکرد ژن و در نتیجه رفتار گیاه تاثیرگذار باشند. به عنوان مثال، با مطالعات بیشتر و استفاده از تکنیکهای مهندسی ژنتیک، میتوان علت زمانهای متفاوت رسیدگی و تفاوت در طول عمر انبارمانی موجود در ارقام مختلف گیلاس را در این اختلاف توالیها جستجو نمود.
واژههای کلیدی: گیلاس، اسید آبسیزیک، پیری، آلفامانوزیداز
فهرست مطالب
عنوان صفحه
1- مقدمه و كلیات............................... 2
1-1- مقدمه................................... 2
1-2- اهداف................................... 3
1-3- فرضیهها................................. 4
2- سابقه تحقیق................................. 6
2-1- خاستگاه و گیاهشناسی گیلاس................ 6
2-2- طبقهبندی ارقام گیلاس..................... 7
2-3- کیفیت میوه.............................. 7
2-3-1- آنتوسیانین.......................... 7
2-3-2- اسیدیته............................. 8
2-3-3- مواد جامد محلول..................... 8
2-3-4- سفتی بافت........................... 9
2-3-5- کلروفیل و کاروتنوئید................ 9
2-3-6- کربوهیدراتها....................... 10
2-4- بلوغ و رسیدگی در گیلاس.................. 10
2-5- انبارمانی گیلاس......................... 11
2-6- فیزیولوژی تنفس......................... 12
2-7- اسید آبسیزیک........................... 13
2-8- پیری................................... 14
2-9- کنترل ژنتیکی متابولیسم گیاه............ 14
2-10- آنزیم آلفامانوزیداز و نقش آن در رسیدگی 15
3- مواد و روش کار............................. 18
3-1- زمان و مکان آزمایش..................... 18
3-2- بخش بیوشیمیایی......................... 18
3-2-1- مواد گیاهی......................... 18
3-2-2- طرح آماری آزمایش................... 18
3-2-3- اندازهگیری سفتی.................... 19
3-2-5- اندازهگیری آنتوسیانین.............. 19
3-2-6- اندازهگیری کلروفیل دم میوه......... 19
3-2-7- اندازهگیری مواد جامد محلول میوه.... 21
3-2-8- اندازهگیری اسیدیته قابل تیتراسیون میوه 21
3-2-9- اندازهگیری قند..................... 21
3-2-9-1- مواد مورد نیاز................. 21
3-2-9-2- استخراج قند.................... 22
3-2-9-3- اندازهگیری قند کل.............. 22
3-2-9-4- منحنی استاندارد قند کل......... 23
3-2-9-5- اندازهگیری فروکتوز............. 23
3-2-9-6- تهیه نمودار استاندارد فروکتوز.. 24
3-3- بخش بیوتکنولوژی........................ 25
3-3-1- مواد گیاهی......................... 25
3-3-2- استخراج DNA........................ 25
3-3-3- طراحی آغازگرها..................... 26
3-3-4- تکثیر قطعات انتخابی................ 27
3-3-5- ارزیابی محصول PCR به وسیله تکنیک الکتروفورز ژل آگارز 28
3-3-6- توالییابی محصول PCR................. 28
3-4- تجزیه و تحلیل آماری.................... 28
4- نتایج و بحث................................ 30
4-1- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر سفتی میوه گیلاس 30
4-2- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر تغییرات آنتوسیانین میوه گیلاس.......................................... 33
4-3- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر کلروفیل کل و کاروتنوئید دم میوه گیلاس.................................. 36
4-4- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر میزان مواد جامد محلول میوه گیلاس..................................... 42
4-5- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر میزان اسیدیته قابل تیتراسیون میوه گیلاس........................... 45
4-6- تاثیر کاربرد پس از برداشت اسید آبسیزیک بر میزان قند کل و فروکتوز میوه گیلاس..................................... 48
4-7- استخراج DNA............................ 53
4-8- نتایج حاصل از طراحی آغازگر............. 54
4-9- تکثیر ژن آلفامانوزیداز در پنج رقم گیلاس. 54
4-10- بررسی نتایج حاصل از توالییابی و همردیفسازی توالیهای بدست آمده 56
4-11- روابط فیلوژنی توالیهای مورد بررسی..... 60
4-12- نتیجهگیری کلی......................... 61
4-13- پیشنهادات............................. 62
فهرست منابع................................... 64
فهرست جدول‌ها
جدول 3-1- مشخصات آغازگر رفت و برگشت طراحی شده برای تکثیر ژن آلفامانوزیدار.............................................. 27
جدول 3-2- مواد و مقادیر مورد نیاز در واکنش PCR 27
جدول 4-1- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر سفتی میوه گیلاس 31
جدول 4-2- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر آنتوسیانین میوه گیلاس 35
جدول 4-3- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر کلروفیل دم میوه گیلاس 39
جدول 4-4- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر کاروتنوئید دم میوه گیلاس 39
جدول 4-5- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر مواد جامد محلول میوه گیلاس 43
جدول 4-6- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر اسیدیته قابل تیتراسیون میوه گیلاس.......................................... 46
جدول 4-7- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر قند کل میوه گیلاس 50
جدول 4-8- تجزیه واریانس تیمارهای اعمال شده بر فروکتوز میوه گیلاس 50
جدول 4-9- مثال‌هایی از بررسی و مقایسه توالی بین نوکلئوتید 260 تا 380 در پنج رقم گیلاس...................................... 56
فهرست شكل‌ها
شکل 3-1- منحنی استاندارد بدست آمده برای قند کل 23
شکل 3-2- منحنی استاندارد بدست آمده برای قند کل 24
شکل 4-1- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر سفتی میوه طی 20 روز پس از برداشت 32
شکل 4-2- مقایسه سفتی میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 32
شکل 4-3- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر سفتی میوه طی 20 روز پس از برداشت.............................................. 33
شکل 4-4- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر آنتوسیانین میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 35
شکل 4-5- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر آنتوسیانین میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 36
شکل 4-6- مسیر تولید اسید آبسیزیک.............. 38
شکل 4-7- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر کلروفیل کل دم میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 39
شکل 4-8- مقایسه کلروفیل کل دم میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت.................................. 40
شکل 4-9- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر کاروتنوئید دم میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 40
شکل 4-10- مقایسه کاروتنوئید دم میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت.................................. 41
شکل 4-11- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر کلروفیل کل دم میوه طی 20 روز پس از برداشت..................................... 41
شکل 4-12- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر کاروتنوئید دم میوه طی 20 روز پس از برداشت..................................... 42
شکل 4-13- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر مواد جامد محلول میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 44
شکل 4-14- مقایسه مواد جامد محلول میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت.............................................. 44
شکل 4-15- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر مواد جامد محلول میوه طی 20 روز پس از برداشت.................................. 45
شکل 4-16- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر اسیدیته قابل تیتراسیون میوه طی 20 روز پس از برداشت.............................. 47
شکل 4-17- مقایسه اسیدیته قابل تیتراسیون میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت........................ 47
شکل 4-18- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر اسیدیته قابل تیتراسیون میوه طی 20 روز پس از برداشت........................... 48
شکل 4-19- مقایسه قند کل میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 50
شکل 4-20- تاثیر تیمار اسید آبسیزیک بر فروکتوز میوه طی 20 روز پس از برداشت.............................................. 51
شکل 4-21- مقایسه فروکتوز میوه گیلاس در دو رقم کرج و تکدانه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 51
شکل 4-22- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر قند کل میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 52
شکل 4-23- اثر متقابل اسید آبسیزیک و رقم بر فروکتوز میوه طی 20 روز پس از برداشت........................................ 52
شکل 4-24- DNA استخراج شده از پنج رقم گیلاس..... 53
شکل 4-25- DNA استخراج شده از پنج رقم گیلاس..... 53
شکل 4-26- نتایج حاصل از طراحی آغازگر.......... 54
شکل 4-27- نتایج حاصل از تکثیر ژن آلفامانوزیداز در پنج رقم گیلاس. 55
شکل 4-28- نتایج حاصل از تکثیر ژن آلفامانوزیداز در پنج رقم گیلاس. 55
شکل 4-29- نتایج حاصل از تکثیر ژن آلفامانوزیداز در پنج رقم گیلاس. 55
شکل 4-30- نتایج حاصل از همردیفسازی توالی معکوس. 57
شکل 4-31- نتایج حاصل از همردیفسازی توالی معکوس. 58
شکل 4-32- نتایج حاصل از همردیفسازی توالی معکوس. 59
شکل 4-33- دندروگرام مربوط به روابط ژنتیکی پنج رقم گیلاس. 60
قیمت فایل فقط 16,900 تومان
برچسب ها : بررسی شاخص های پیری و ردیابی ژن آلفامانوزیداز مرتبط با پیری در چند رقم گیلاس , شاخصهای پیری , ردیابی ژن آلفامانوزیداز , پیری , رقم , گیلاس , اسید آبسیزیک , آلفامانوزیداز , پژوهش , مقاله , تحقیق , پروژه , پایان نامه , دانلود پژوهش , دانلود مقاله , دانلود تحقیق
دانلود پروژه و پایان نامه
